ELISA試劑盒試驗操作過程解析

ELISA檢查以靈敏度較高、特異性較好等特點在食品安全檢查中得到廣泛的運用，但在操作中的各個環節對試驗的檢查作用影響較大。如不留意，有也許致使顯色不*、花板、檢查無效等成果。所以試驗進程中應留意選擇質量的檢查試劑，嚴厲依照試劑闡明書進行操作。在ELISA操作進程中，一起做好室內質控、室間質評，仔細做好各項查驗記載，才干確保ELISA檢查質量。
一、樣品的保留
用于ELSIA檢查的樣本十分廣泛，包含各種動物安排、動物體液以及其他食品獲取物等。有些樣本能夠直接經過簡略離心、稀釋，有些則需求經過理化辦法進行獲取。檢查樣品應確保新鮮，經前處理的獲取液應及時進行檢查，時刻越長，獲取液中的抗原的效價越低。如不及時檢查，應及時放4℃冰箱保留。防止細菌污染，因菌體中也許富含內源性HRP，也許會致使假陽性反響。如在冰箱中保留過久，其間的HRP也許發生聚合，在間接法ELSIA檢查中可使本底加深。所以標本如需保留做屢次檢查，宜選用少數分裝冰箱保留。安排樣本若不及時做處理，應當放置-15℃冰箱保留。

二、試劑的預備
嚴厲依照試劑盒的闡明書的請求預備好需求用到的試劑。LEISA檢查中應選用蒸餾水或許去離子水，洗刷用水應新鮮和高質量，留意檢查是不是需求和洗刷液進行稀釋。自配的緩沖液運用PH計測量校對。從冰箱取出的試劑有必要與室溫平衡方可運用。試劑盒中本次試驗不需求的試劑有些及時放回冰箱保留。

三、加樣
在ELSIA加樣進程中，應加所加物加到ELISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發生氣泡。加標本通常運用微量加樣器，按規則的量參加孔板中。每次加標本有必要更換槍頭，防止穿插污染。加酶符號物和底物液時可用定量多道加樣器，使加樣進程敏捷完成。
四、溫育
溫育的方法通常選用水浴，可將酶標板置于水浴箱中，酶標板底貼著水面，是溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，酶標板上應加蓋，也可用塑料貼封或許保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若保溫箱，酶標板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱功能杰出的資料或許如金屬等，在盒底墊濕的紗布，將酶標板放在紗布上。這樣能確保安穩敏捷平衡。不管水浴還是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時的室溫要嚴厲約束在室溫的范圍內，規范室溫溫度是指20℃-25℃，詳細的操作時刻依據闡明書的請求嚴厲控制溫育。
五、洗刷
洗刷在ELISA進程中雖然不是一個反響進程，可是卻決議著試驗的勝敗，ELSIA反響即是靠洗刷來到達將游離和的酶符號物別離的意圖。經過洗刷來清洗掉殘留在酶標板是未能與固相抗原或抗體的物質，已經在反響進程中十分特異性地吸附于固相載體上的攪擾物質。聚苯乙烯等塑料資料對蛋白質的吸附石普遍性的，而在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。能夠說在ELSIA操作進程中，洗刷是首要的關鍵技術，每一次清洗都有必要謹慎進行，操作者應嚴厲依照請求進行洗刷。清洗的方法有手藝清洗和洗板機主動清洗兩種。下面首要介紹手藝清洗方法。
1、吸干或許甩干孔內反響液
2、用洗刷液洗一遍。（將洗刷液注滿板孔后，即甩去）
3、浸泡，將洗刷液注滿酶標孔，放置1-2min，間歇搖擺，浸泡時刻不行隨意縮短。
4、甩掉孔內液體，用清洗毛巾或許吸水紙拍干。
5、重復3和4進程，洗刷4次。
六、顯色和比色
顯色是ELSIA中的zui后一個溫育進程，此刻酶催化無色底物出產有色商品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的zui主要的要素。參加底物后的反響時刻和溫度應當按規則嚴厲控制。
七、酶標儀讀板
測讀吸光度值時，要選用商品的靈敏吸收峰。有的酶標儀可用雙波長讀數，即每孔先后讀兩次，在波長，第二次在不靈敏的波長，兩次測讀不移動酶標板的方位。終究讀數得到值為兩者之差，即靈敏波長值減去不靈敏波長值。雙波長讀數能夠減少由容器壁劃痕或指紋形成的光攪擾。
八、成果判定
依據試驗讀數，成果商品闡明進行成果判定。