磷酸化多抗和單抗的制備

蛋白質的翻譯后修飾在蛋白質組學研究領域具有重要地位，近年來表現出更為火爆的趨勢。蛋白質的翻譯后修飾是指蛋白質在翻譯后會在不同的基團上發生不同的修飾，如磷酸化、糖基化、甲基化、乙酰化等。蛋白質磷酸化是各種蛋白質修飾方式中zui為常見、zui重要的一種，它由蛋白激酶和磷酸酶，這兩個作用相反的酶系構成，是一個可逆的過程。研究發現，蛋白質的可逆磷酸化幾乎涉及到生物體內多種生理和病理過程，如糖代謝、光合作用、細胞的生長發育、基因表達、神經遞質的合成與釋放，甚至癌變等等，在細胞的信號傳遞過程中占有極其重要的地位，是細胞生命活動的調控中心。磷酸化的抗體可以特異性的識別蛋白質磷酸化位點，可以作為蛋白質是否磷酸化的重要檢測工具，而且可以在避免放射性污染的情況下，對磷酸化蛋白進行定性和定量分析，因此特異性磷酸化抗體是研究蛋白質磷酸化的重要工具。

    磷酸化抗體和非磷酸化抗體在研究中的應用各有不同，制備工藝上也有所區別，主要表現在以下幾個方面：

   1、磷酸化抗體是針對蛋白磷酸化位點設計制備的，主要用于檢測蛋白磷酸化的變化情況。

   2、非磷酸化抗體（普通抗體）是針對蛋白非磷酸化位點設計制備的，主要檢測組織或細胞中該蛋白的表達情況，組織特異性或亞細胞地位，也可以作為磷酸化水平變化的內參等。

   3、普通抗體的合成：蛋白或者偶聯多肽->免疫動物->收獲多抗（細胞融合->腹水制備->單抗純化）。

   4、磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點的多肽->人工體外磷酸化->多肽偶聯載體->免疫動物->收獲多抗（細胞融合->腹水制備->單抗純化）。